色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长290nm。理论塔板数按落新妇苷峰计算应不低于3000。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~13 | 10→12 | 90→88 |
13~20 | 12→13 | 88→87 |
20~25 | 13→15 | 87→85 |
25~35 | 15→17 | 85→83 |
35~50 | 17 | 83 |
50~55 | 17→25 | 83→75 |
55~60 | 25→100 | 75→0 |
对照品溶液的制备精密称取落新妇苷对照品适量,加60%甲醇制成每1ml含10μg的溶液,即得。
定位对照品溶液精密称取落新妇苷对照品1.95mg,置150ml具塞锥形瓶中,精密加水10ml,称定重量,加热回流2小时,放冷,再称定重量,加水补足减失的重量,转移至25ml量瓶中,用甲醇洗涤锥形瓶并转移至同一量瓶中,定容,摇匀,作定位对照品溶液。
供试品溶液的制备取滑膜炎片研细,取粉末1g,精密称定,精密加入60%甲醇50ml,密塞,超声处理(功率500W,频率25kHz)30分钟,取出,放冷,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。