检验方法:
(1)当归养血丸中阿胶的高效液相色谱-质谱法鉴别
取本品适量,研细,取1.70g,置50ml量瓶中,加1%碳酸氢铵溶液40ml,超声处理30分钟使溶散,加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度,摇匀,离心(3500转/分钟)5分钟,将上清液转移至另一离心管中,再离心(3500转/分钟)5分钟,取上清液,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,再用0.22μm微孔滤膜滤过,取续滤液100μl,置微量进样瓶中,加胰蛋白酶溶液(取序列分析级胰蛋白酶,加1%碳酸氢铵溶液制成每1ml含1mg的溶液,临用新制)10μl,摇匀,37℃恒温酶解12小时,作为供试品溶液。另取阿胶对照药材0.1 g,置50ml量瓶中,加1%碳酸氢铵溶液40ml,超声处理30分钟,使样品完全溶解,加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度,摇匀,自“用0.22μm微孔滤膜滤过”起,同法制成对照药材溶液。照高效液相色谱-质谱法(《中国药典》2015年版四部通则0512和通则0431)试验,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(色谱柱内径为2.1mm);以乙腈为流动相A,以0.1%甲酸溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱,流速为每分钟0.3m1。采用质谱检测器,电喷雾正离子模式(ESI+),进行多反应监测(MRM),选择质荷比(m/z)539.8(双电荷)→612.4和539.8(双电荷)→923.8作为检测离子对。取阿胶对照药材溶液,进样5μl,按上述检测离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于3:1。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~25 | 3→20 | 97→80 |
25~40 | 20→50 | 80→50 |
吸取阿胶对照药材溶液5μl,注入高效液相色谱-质谱联用仪,测定。以质荷比(m/z)539.8(双电荷)→612.4和539.8(双电荷)→923.8离子对提取的供试品离子流色谱中,应同时呈现与阿胶对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。