人参养荣丸中人参、五味子、肉桂的含量测定方法

发布时间:2019-05-16

人参照高效液相色谱-质谱法(中国药典2015年版四部通则0431和0512)测定。

色谱质谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(推荐Waters Cortecs T3色谱柱,2.1mm×100mm,2.7μm);以含10mmol/L甲酸铵的0.1%甲酸溶液为流动相A,以乙腈为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱,流速0.3ml/min。

时间(分钟)

流动相A(%)

流动相B(%)

0~15

95→2

5→98

采用三重四极杆质谱检测器,电喷雾离子化(ESI)负离子模式下多反应监测(MRM)选择质荷比(m/z)845.5→799.5离子对(人参皂苷Rg1)、991.6→945.5离子对(人参皂苷Re)和1108.2→783.3离子对(人参皂苷Rb1)进行检测。

对照品溶液的制备:取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1对照品,加甲醇制成5μg/ml、2μg/ml、1μg/ml、500ng/ml、100ng/ml的系列混合溶液,作为对照品溶液。

供试品溶液的制备:取水蜜丸、小蜜丸适量,研碎;或取大蜜丸,剪碎,混匀,取约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,称定重量,浸泡过夜,超声处理1小时至完全溶散(温度40℃以下),放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,离心(4000转/分钟)5分钟,取上清液,即得。

测定法:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1µl,注入液相色谱-质谱仪,测定,即得。以对照品离子对峰面积为纵坐标,对照品浓度为横坐标,绘制标准曲线,从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb1的量,计算,即得。

本品含人参以人参皂苷Rg1(C42H72O14)、人参皂苷Re(C48H82O18)的总量计,大蜜丸每丸不得少于0.88mg,水蜜丸每1g不得少于0.15mg,小蜜丸每1g不得少于0.10mg;以人参皂苷Rb1(C54H92O23)计,大蜜丸每丸不得少于0.59mg,水蜜丸每1g不得少于0.10mg,小蜜丸每1g不得少于0.07mg。人参皂苷Re与人参皂苷Rg1的含量比值不得过3.0。

五味子、肉桂照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(推荐Waters HSS T3色谱柱,2.1mm×100mm,1.8μm);以0.1%甲酸溶液流动相A,乙腈为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱,流速0.6ml/min;检测波长为250nm(五味子醇甲、五味子甲素)和290nm(桂皮醛);理论板数按桂皮醛峰计算应不低于30000。

时间(分钟)

流动相A(%)

流动相B(%)

0~1

92

8

1~20

92→80

8→20

20~40

80→20

20→80

对照品溶液的制备 取桂皮醛对照品、五味子醇甲对照品及五味子甲素对照品适量,加甲醇制成每1ml各含4μg/ml的混合溶液,摇匀,即得。

供试品溶液的制备 取水蜜丸、小蜜丸适量,研碎;或取大蜜丸,剪碎,混匀,取约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,密塞,称定重量,浸泡过夜,超声处理1小时至完全溶散(温度40℃以下),放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,离心(4000转/分钟)5分钟,取上清液,即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各4µl,注入液相色谱仪,测定,即得。

本品含五味子以五味子醇甲(C24H32O7)计,大蜜丸每丸不得少于0.88mg,水蜜丸每1g不得少于0.15mg,小蜜丸每1g不得少于0.10mg。五味子醇甲与五味子甲素峰面积比值不得低于1.0。

含肉桂以桂皮醛(C9H8O)计,大蜜丸每丸不得少于0.64mg,水蜜丸每1g不得少于0.11mg,小蜜丸每1g不得少于0.07mg。