有关物质临用新制：取装量差异项下的内容物适量（约相当于氨苄西林，按C16H19N3O4S计75mg），精密称定，置25ml量瓶中，加临用新制的0.5%碳酸钠溶液2.5ml溶解后，用流动相A稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；取对照溶液5ml，置50ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度溶液。照高效液相色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0512）测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为12%醋酸溶液-0.2 mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈-水（0.5：50：50：900）；流动相B为12%醋酸溶液-0.2 mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈-水（0.5：50：400：550）；检测波长为254 nm。先以流动相A-流动相B（85:15）等度洗脱，待氨苄西林峰洗脱完毕后立即按下表进行线性梯度洗脱。取氨苄西林系统适用性对照品适量，加流动相A溶解并稀释制成每1ml中约含2mg的溶液，取 20μl注入液相色谱仪，记录的色谱图中出峰顺序为：氨苄西林噻唑酸及其异构体（与氨苄西林相对保留时间约为0.6和0.7）、氨苄西林峰、氨苄西林青霉烷酸及异构体（与氨苄西林相对保留时间约为1.2和1.5）、2’,5’-二酮哌嗪-2（R）氨苄西林（与氨苄西林相对保留时间约为2.6），D-苯甘氨酸氨苄西林（与氨苄西林相对保留时间约为2.7）、氨苄西林开环二聚体（与氨苄西林相对保留时间约为3.4），氨苄西林杂质9（与氨苄西林相对保留时间约为3.7）、氨苄西林闭环二聚体（与氨苄西林相对保留时间约为3.8）、氨苄西林开环三聚体（与氨苄西林相对保留时间约为4.6），氨苄西林峰的保留时间约为8分钟，各峰之间分离度应符合要求。取灵敏度溶液20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，氨苄西林峰峰高的信噪比应大于10。立即精密量取供试品溶液与对照溶液各20 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，氨苄西林闭环二聚体不得大对照溶液中于氨苄西林峰面积的1倍（1.0%），氨苄西林其他单一杂质峰面积不得大对照溶液中于氨苄西林峰面积的2倍（2.0%），氨苄西林其他各杂质峰面积和不得大对照溶液中于氨苄西林峰面积的5倍（5.0%），丙磺舒各杂质峰面积的和得大对照溶液中于丙磺舒峰面积的1倍（1.0%），供试品溶液色谱图中小于灵敏度溶液主峰面积的峰忽略不计。
时间（min） | 流动相A（%） | 流动相B（%） |
0 | 85 | 15 |
10 | 85 | 15 |
30 | 28 | 72 |
60 | 0 | 100 |
110 | 0 | 100 |
111 | 85 | 15 |
121 | 85 | 15 |
