【特征图谱】照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验: 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(色谱柱内径2.1mm);以乙腈为流动相A,以水为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;流速为每分钟0.3ml;柱温为30℃;检测波长为210nm。理论板数按穿心莲内酯峰计算应不低于20000。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~5 | 10→15 | 90→85 |
5~15 | 15→22 | 85→78 |
15~20 | 22→25 | 78→75 |
20~30 | 25→35 | 75→65 |
对照品溶液的制备:取穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含穿心莲内酯0.4mg、脱水穿心莲内酯0.2mg的混合溶液,即得。
对照药材溶液的制备:取穿心莲对照药材1.0g,置具塞锥形瓶中,加入85%乙醇50ml,加热回流1h,取出,放冷,摇匀,滤过,即得。
供试品溶液的制备:取重量差异项下的本品,研细,小片取约1片的量,大片取约1/2片的量(相当于穿心莲药材1.0g),精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液、对照药材溶液与供试品溶液各2μl,注入超高效液相色谱仪,测定,即得。
结果判定:供试品色谱应呈现7个与对照药材特征图谱相对应的色谱峰;其中1、7号峰保留时间应与穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品色谱峰保留时间相对应,且穿心莲内酯的峰面积值不得低于脱水穿心莲内酯峰面积值的1/3。
图1 对照药材特征图谱