【含量测定】大青叶:照液相色谱法(中国药典2015年版通则0512)测定。
色谱条件及系统适应性试验:亲水色谱柱(Syncronic HILIC 4.6×250mm,5μm,Thermo公司),柱温为30℃;以2.5mmol/L乙酸铵、25mmol/L冰乙酸水溶液为流动相A,以乙腈为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长259nm。理论板数按尿苷峰计算应不低于4000。
时间 | A% | B% |
0 | 3 | 97 |
18 | 3 | 97 |
30 | 4 | 96 |
50 | 20 | 80 |
52 | 3 | 97 |
60 | 3 | 97 |
对照品溶液的制备:精密称取尿苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含尿苷25ug的溶液,即得。
供试品溶液的制备:取清火片20片或取清火胶囊20粒内容物,称定重量,研细,精密称取粉末约相当于清火片小片10片重(大片5片,胶囊5粒),置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇20ml,称定重量,超声处理(功率270W,频率40kHz)10分钟,取出,放凉,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,弃去初滤液。精密吸取续滤液10ml,置蒸发皿中,水浴蒸去甲醇,加于已处理好的D101大孔树脂柱(37.5px*200px)上,用水洗脱至25ml量瓶中,用水调整至刻度,摇匀,用0.45um微孔滤膜滤过,弃去初滤液,取续滤液,即得。
测定法:分别精密吸取上述两种溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
清火片每片含大青叶以尿苷(C9H12N2O6)计,小片不得少于0.03mg,大片不得少于0.06mg;清火胶囊每粒含大青叶以尿苷(C9H12N2O6)计,不得少于0.06mg。