色谱条件 Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱( 4.6 mm ×250 mm, 5μm) ;以水-乙腈为流动相,按表1中的规定进行梯度洗脱;检测波长为203nm。流速1.0 mL/min ;进样量10μl。
表1梯度洗脱程序
时间(min) | 水(%) | 乙腈(%) |
0.0 | 85 | 15 |
12.0 | 85 | 15 |
50.0 | 78 | 22 |
65.0 | 76 | 24 |
100.0 | 60 | 40 |
100.1 | 20 | 80 |
110.0 | 20 | 80 |
110.1 | 85 | 15 |
120.0 | 85 | 15 |
对照品溶液的制备 分别精密称取三七总皂苷对照品24.14mg(三七皂苷R1按7.4%计、人参皂苷Rg1按26.3%计、人参皂苷Re按3.7%计、人参皂苷Rb1按27.7%计、人参皂苷Rd按7.6%计),人参皂苷Rg1对照品(按93.6%计)10.33mg,人参皂苷Rb1(按91.1%计)对照品10.83mg,三七皂苷R1(按95.0%计)对照品10.26mg,人参皂苷Rd(按92.1%计)对照品12.28mg,人参皂苷Re(按97.4%计)对照品10.82mg,分别加甲醇制成浓度为三七总皂苷0.9656mg/ml、人参皂苷Rg1 0.0967mg/ml、人参皂苷Rb1 0.0987mg/ml、三七皂苷R1 0.0975mg/ml、人参皂苷Rd 0.1131mg/ml、人参皂苷Re 0.1054mg/ml的对照品溶液。
供试品溶液的制备取本品20片,薄膜衣片除去包衣,精密称定,研细,取约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水饱和的正丁醇50ml,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率33kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用水饱和正丁醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25ml,加氨试液洗涤2次(15ml,10ml),取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇使溶解,转移至5ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
对照药材溶液的制备 取三七对照药材0.6g(过四号筛),置具塞锥形瓶中,精密加入水饱和的正丁醇50ml,同法制成三七对照药材溶液。
测定条件 按上述色谱条件,分别精密吸取对照品溶液10µl、对照药材10µl、供试品溶液10µl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品含人参皂苷Rb1(C54H92O23)、人参皂苷Rg1(C42H72O14)及三七皂苷R1(C47H80O18)的总量不得少于2.00mg/片。