照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验用 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,以0.01mol·L-1乙酸铵水溶液为流动相B,,按下表中的规定进行梯度洗脱,检测波长为马兜铃酸A:250nm,鬼臼毒素:225nm,金胺O:430nm,流速为1mL·min-1;柱温为30℃。理论板数按马兜铃酸A峰计算均应不低于5000。
时间(min) | 流动相A (%) | 流动相B(%) |
0~15 | 18 | 82 |
15~35 | 18→25 | 82→75 |
35~65 | 25→55 | 751→25 |
对照品溶液的制备 精密称取马兜铃酸A、鬼臼毒素、金胺O对照品适量,加70%甲醇制成每1ml分别含马兜铃酸A 30µg、鬼臼毒素15µg、金胺O10µg的3种对照品混合溶液。
供试品溶液的配制 取本品,除去包衣,研细,取约2g,精密加入70%甲醇15ml,称定重量,超声处理(功率300W,频率40kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
供试品在与3种对照品相应波长下相应的保留时间处,不得出现与3种对照品光谱图一致的色谱峰。