【指纹图谱】 照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈溶液为流动相A,以含0.1%磷酸的水溶液为流动相B,,按下表中的规定进行梯度洗脱,检测波长为254nm、280nm,流速为1mL·min-1;柱温为30℃。理论板数按栀子苷、黄芩苷计算均应不低于5000。
时间(min) | 流动相A (%) | 流动相B(%) |
0~25 | 1→33 | 99→67 |
25~50 | 33→49 | 67→51 |
50~60 | 49→65 | 51→35 |
参照溶液的制备 分别取龙胆苦苷、栀子苷、甘草酸铵、柴胡皂苷B1、柴胡皂苷B2、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、京尼平苷酸、西红花苷、毛蕊花糖苷、野黄芩苷、阿魏酸对照品适量,精密称定,加70%甲醇溶解,制成每1ml含栀子苷0.4mg、龙胆苦苷0.4mg、甘草酸铵0.2mg、柴胡皂苷B1 0.02mg、柴胡皂苷B2 0.04mg、黄芩苷0.2mg、汉黄芩苷0.4mg、黄芩素0.1mg、汉黄芩素0.1mg、京尼平苷酸0.4mg、西红花苷1mg、毛蕊花糖苷0.4mg、野黄芩苷0.2mg、阿魏酸0.4mg对照品母液。
分别精密吸取栀子苷对照品母液栀子苷3ml、龙胆苦苷2ml、甘草酸铵1ml、柴胡皂苷B1 1ml、柴胡皂苷B2 1ml、黄芩苷10ml、汉黄芩苷1ml、黄芩素2ml、汉黄芩素1ml、京尼平苷酸0.5ml、西红花苷0.5ml、毛蕊花糖苷0.5ml、野黄芩苷0.5ml、阿魏酸0.5ml置同一25ml量瓶中,制成每1ml分别含栀子苷48μg、龙胆苦苷32μg、甘草酸铵8μg、柴胡皂苷B1 0.8μg、柴胡皂苷B2 1.6μg、黄芩苷80μg、汉黄芩苷16μg、黄芩素8μg、汉黄芩素4μg、京尼平苷酸8μg、西红花苷20μg、毛蕊花糖苷8μg、野黄芩苷4μg、阿魏酸8μg的对照品混合溶液,即得
供试品溶液的制备 取本品20片,除去包衣,精密称定,研细,取约0.5g,精密称定,置具塞三角锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,称定重量,超声处理(功率300W,频率40kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,记录色谱图,即得。
指纹图谱 按中药色谱相似度评价系统计算,屏蔽6号色谱峰后,同企业不同批号之间相似度以及不同企业之间相似度。两个波长下,同企业不同批号之间的相似度均应在0.90以上,不同企业与各剂型的对照图谱(各企业对照图谱导入指纹图谱软件计算分析后再生成的剂型对照图谱)之间的相似度均应在0.85以上。
特征图谱254nm、280nm下,供试品特征图谱中应共呈现峰1、峰2、峰3、峰4、峰5、峰6、峰7、峰8、峰9共9个特征峰,并应分别与相应的参照物保留时间一致。