【含量测定】 照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈溶液为流动相A,以含0.1%磷酸的水溶液为流动相B,,按下表中的规定进行梯度洗脱,检测波长为龙胆苦苷、栀子苷、甘草酸、柴胡皂苷B1、柴胡皂苷B2:254nm,黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素:280nm,流速为1mL·min-1;柱温为30℃。理论板数按栀子苷、黄芩苷计算均应不低于5000。
时间(min) | 流动相A (%) | 流动相B(%) |
0~25 | 1→33 | 99→67 |
25~50 | 33→49 | 67→51 |
50~60 | 49→65 | 51→35 |
对照品溶液的制备分别取龙胆苦苷、栀子苷、甘草酸铵、柴胡皂苷B1、柴胡皂苷B2、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对照适量,精密称定,加70%甲醇溶解,制成每1ml含栀子苷0.4mg、龙胆苦苷0.4mg、甘草酸铵0.2mg、柴胡皂苷B10.02mg、柴胡皂苷B2 0.04mg、黄芩苷0.2mg、汉黄芩苷0.4mg、黄芩素0.1mg、汉黄芩素0.1mg对照品母液。
分别精密吸取栀子苷对照品母液栀子苷3ml、龙胆苦苷2ml、甘草酸铵1ml、柴胡皂苷B11ml、柴胡皂苷B21ml、黄芩苷10ml、汉黄芩苷1ml、黄芩素2ml、汉黄芩素2ml置同一25ml量瓶中,制成每1ml分别含栀子苷48μg、龙胆苦苷32μg、甘草酸铵8μg、柴胡皂苷B1 0.8μg、柴胡皂苷B2 1.6μg、黄芩苷80μg、汉黄芩苷16μg、黄芩素8μg、汉黄芩素8μg的对照品混合溶液,即得(甘草酸重量=甘草酸铵重量/1.0207)
供试品溶液的制备 取本品20片,除去包衣,精密称定,研细,取约0.5g,精密称定,置具塞三角锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,称定重量,超声处理(功率300W,频率40kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液10µl与供试品溶液5~10µl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品每片含栀子以栀子苷计(C17H24O10)不得少于0.63mg,含龙胆以龙胆苦苷(C16H20O9)计不得少于1.17mg,含甘草以甘草酸(C42H62O16)计不得少于0.32mg,含柴胡以柴胡皂苷B1(C42H68O13)和柴胡皂苷B2(C42H68O13)的总量计不得少于0.072mg,含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)、汉黄芩苷(C22H20O11)、黄芩素(C15H10O5)和汉黄芩素(C16H12O5)的总量计不得少于4.15mg。