①柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、偶氮玉红(酸性红)、酸性红73、金橙Ⅱ、赤藓红10种色素HPLC-DAD检验方法
照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇为流动相A,以0.02mol/L乙酸铵溶液为流动相B;按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长:430nm检测柠檬黄;510nm检测新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、偶氮玉红(酸性红)、酸性红73、金橙Ⅱ、赤藓红。理论塔板数按柠檬黄峰计算应不低于2000。
时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~8 | 8→12 | 92→88 |
8~20 | 12→55 | 88→45 |
20~28 | 55→70 | 45→30 |
28~30 | 70→8 | 30→92 |
30~35 | 8 | 92 |
混合对照品溶液的制备取柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、偶氮玉红(酸性红)、酸性红73、金橙Ⅱ、赤藓红对照品适量,加10%乙醇溶解,制成每1ml含20μg的混合溶液,即得。
供试品溶液的制备取本品片剂10片(胶囊剂10粒),片剂除去包衣(胶囊剂取内容物),研细,取粉末1g,置具塞锥形瓶中,加入10%乙醇10ml超声处理(功率250W,频率40KHz)30分钟,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
结果判断供试品色谱中,应不得检出与混合对照品中各对照品色谱保留时间相同的色谱峰;若出现相同的色谱峰,采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰的紫外-可见吸收光谱,吸收光谱应不相同。
必要时可采用HPLC-MS进行验证。
②金胺O、罗丹明B、碱性橙2、碱性橙22、苏丹红Ⅰ、808猩红、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ8种色素HPLC-DAD检验方法
照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,以0.02 mol/L乙酸铵溶液为流动相B,按下表进行梯度洗脱;流速1.0 ml/min;进样量5 μl;在波长430nm处检测金胺O、碱性橙2;在波长510nm处检测碱性橙22、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅲ、808猩红、苏丹红Ⅳ、罗丹明B。理论板数按偶氮玉红峰计算应不低于2000。
时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~8 | 20→60 | 80→40 |
8~15 | 60 | 40 |
15~17 | 60→90 | 40→10 |
17~30 | 90→92 | 10→8 |
30~32 | 92→20 | 8→80 |
32~35 | 20 | 80 |
混合对照品溶液的制备精密量取上述对照品适量,制备成每1ml含金胺O、罗丹明B、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ各5μg,含碱性橙2、碱性橙22、苏丹红Ⅰ各10μg,含808猩红25μg的混合溶液,即得。
供试品溶液的制备取本品片剂10片(胶囊剂10粒),片剂除去包衣(胶囊剂取内容物),研细,取粉末1g,置具塞锥形瓶中,加70%乙醇溶液10 ml,密塞,超声处理(功率250W,频率40KHz)30 分钟,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
结果判断供试品色谱中,应不得检出与混合对照品中各对照品色谱保留时间相同的色谱峰;若出现相同的色谱峰,采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰的紫外-可见吸收光谱,吸收光谱应不相同。
必要时可采用HPLC-MS进行验证。