一、方法草案照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部0512)测定
1 液相筛查方法研究
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂;以乙腈为流动项A,0.05mol/L乙酸铵为流动项B,按下表进行梯度洗脱,柱温为35℃;检测波长为432nm;进样量5μl。
表1 液相方法梯度洗脱程序
时间(min) | A(%) | B(%) |
0 | 10 | 90 |
5 | 10 | 90 |
25 | 60 | 40 |
30 | 60 | 40 |
32 | 10 | 90 |
40 | 10 | 90 |
对照品溶液的制备取柠檬黄、日落黄、金胺O、金橙II对照品适量,精密称定,加70%乙醇制成每1ml含10μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备取安胃片研细,称取粉末约10g;取安胃胶囊内容物8g;取安胃颗粒研细,称取粉末10g,精密称定,置锥形瓶中,加入70%乙醇20ml,超声处理(功率500W,频率40kHz)30min,放冷,滤过,取续滤液,即得。
测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
结果判断供试品色谱中,应不得检出与对照品保留时间相同的色谱峰,若出现保留时间相同的色谱峰,则采用二极管阵列检测器比较色谱峰的紫外-可见吸收光谱,吸收光谱应不相同。若检出,则采用液相色谱质谱联用方法确定供试品一级质谱图与二级质谱图与对照品不得一致。
2 液质联用快筛方法研究
依据《中国药典》2015年版四部色素测定法指导原则,建立柠檬黄、日落黄、金胺O、金橙II的液质检测方法。
液相色谱方法:以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂;以乙腈为流动项A,2mmol/L乙酸铵为流动项B,按下表进行梯度洗脱,柱温为35℃;进样量5μl。
表2液质方法梯度洗脱程序
时间(min) | A(%) | B(%) |
0 | 10 | 90 |
1 | 10 | 90 |
8 | 60 | 40 |
8.1 | 10 | 90 |
10 | 10 | 90 |
质谱方法:各质谱参数如下表:
表3 质谱参数
Capillary: | 3.0 kv | Cone: | 35V | Extractor: | 2v | RF Lens: | 0.0v |
Source Temp(℃): | 120℃ | Desolution Temp(℃): | 350℃ | ||||
Gas flow: | Desolution(L/hr) | 500 | Cone(L/hr) | 50 | |||
Analyser: | LMResolution1: | 15.0 |
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| |
| HM Resolution1: | 15.0 | | | |
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| IonEnergy1: | 1.0 |
| | |
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参考药典指导原则选择各对照品监测离子对。
表4 对照品监测离子对
对照品 | 采集模式(+/-) | 母离子 | 子离子 | 碰撞能量(V) |
柠檬黄 | - | 232.8 | 197.8 | 10 |
232.8 | 211.0 | 10 | ||
日落黄 | - | 203.1 | 170.9 | 15 |
203.1 | 206.9 | 15 | ||
金胺O | + | 267.9 | 147.1 | 25 |
267.9 | 252.2 | 32 | ||
金橙II | - | 326.7 | 155.7 | 30 |
326.7 | 170.8 | 30 |
对照品溶液与供试品溶液制备:取液相筛查方法中溶液,以甲醇稀释100倍,即得。