色谱条件:色谱柱为Thermo BDS HYPERSIL C18(4.6×250mm5μm),流动相为乙腈(A),0.02mol/L磷酸二氢铵(用三乙胺调pH值为5.5)(B)。梯度洗脱条件见下表。流速 1.0 ml•min-1,柱温35℃,进样量10 μl,检测波长230 nm(苯甲酸、山梨酸)、254nm(对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯)。上述色谱条件下,各组分分离度良好,见下图。
时间 | A(%) | B(%) |
0 | 2 | 98 |
10 | 10 | 90 |
30 | 50 | 50 |
40 | 50 | 50 |
对照品溶液的制备
分别精密称取苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯6种对照品20.46mg、21.09mg、20.34mg、20.61mg、20.93mg、20.67mg,分别置20ml的量瓶中,用乙腈-水(5:95)的混合溶剂稀释至刻度,混匀,备用。
分别精密量取苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯各2ml,置于同一20 ml量瓶中,用乙腈-水(5:95)的混合溶剂稀释至刻度,混匀,作为对照品储备液。
精密量取对照品储备液8、5、2、1、0.5、0.1ml,分别置10 ml量瓶中,加乙腈-水(5:95)的混合溶剂稀释至刻度,混匀,制成对照品溶液。
供试品溶液的制备
精密量取清喉咽合剂1ml,置20 ml量瓶中,加乙腈-水(5:95)的混合溶剂稀释至刻度,混匀,滤过,精密量取续滤液2ml,置10ml的量瓶中,加乙腈-水(5:95)的混合溶剂稀释至刻度,混匀,用0.45μm的滤膜滤过,作为供试品溶液。
6种对照品色谱图