色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以醋酸钠溶液（取醋酸钠6.6g、3ml冰醋酸至1000ml水中，调pH至4.5±0.1）-甲醇（60:40）为流动相，流速为每分钟1.0ml，检测波长为220nm，柱温30℃。取20μl 注入液相色谱仪，记录色谱图，苯巴比妥峰理论塔板数应不低于3000，苯巴比妥峰与苯丁酰脲杂质峰之间的分离度均应符合要求。

测定法精密量取本品适量，用甲醇定量稀释制成每1ml 中约含苯巴比妥钠2mg 的溶液，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取苯丁酰脲对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每1ml 中含20μg 的溶液，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录苯巴比妥主峰3倍保留时间，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有与苯丁酰脲保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算苯丁酰脲含量。