鹿骨种属鉴别聚合酶链式反应法。

模板DNA提取取本品适量，打粉，称取粉末约0.1g，置1.5ml离心管中，加0.5mol/L 乙二胺四醋酸二钠溶液（pH8.0）1ml，4℃放置24小时，期间混匀数次。以每分钟3000转离心15分钟，弃去上清液。沉淀用水洗涤二次，每次1ml，并以每分钟3000转离心15分钟，弃去上清液。根据DNA提取试剂盒（如“柱式骨骼DNAout提取试剂盒”或其他经过验证的相同类型试剂盒）说明书提取DNA。取DNA提取液，用水稀释至合适浓度，照紫外-可见光分光光度法（中国药典2015年版四部通则0401），在260nm的波长处测定吸光度（A260），按下式计算出DNA提取液浓度。取DNA提取液适量，用水稀释制成每1ml中约含5μg DNA的溶液，作为供试品的模板DNA溶液。另取梅花鹿骨对照品适量，打粉，同法操作，制成每1ml中约含5μg DNA的对照品的模板DNA溶液。

式中C为DNA提取液浓度（μg/ml）；

A260为供试品在260nm处的吸光度；

0.020为每1ml含有1μg DNA的溶液在260nm处的吸光度；

L为光程（cm）；

N为基因组DNA提取液的稀释倍数。

PCR扩增根据PCR扩增试剂说明书配制反应体系，总反应体积为20μl，其中模板DNA溶液为1μl，鉴别引物序列为5'-GAC CTC CCA GCC CCA TCG-3'和5'-GCT GTG GCT ATA ACT GTA AAT AGG AGG-3'，混匀后，按下列条件进行扩增：94℃ 5分钟，循环反应35次（94℃ 30秒，58℃ 30秒，72℃ 30秒），72℃5分钟，4℃保温结束反应。

限制性内切酶酶切反应分别取供试品及对照品的PCR扩增产物各5μl，根据限制性内切酶（Xba I）说明书配制反应体系，混匀后，在37℃反应1小时，总反应体积为10µl。

测定法

（1）试剂

琼脂糖凝胶电泳缓冲液取三羟甲基氨基甲烷4.84g，二水合乙二胺四醋酸二钠0.37g，加水800ml，充分搅拌使溶解。再加冰醋酸1.14ml，搅拌均匀，用氢氧化钠试液调节pH值至8.3，用水稀释至1000ml，即得。

上样缓冲液取溴酚蓝0.25g，二水合乙二胺四醋酸二钠1.12g，加水30ml，充分搅拌使溶解，用氢氧化钠试液调节pH值至8.0，加甘油50ml，混匀，用水稀释至100ml，即得。

（2）制胶

取琼脂糖1.5g，加琼脂糖凝胶电泳缓冲液50ml，加热使完全溶胀，加入核酸染料5μl，趁热将胶液涂布于制胶板上，涂层厚度约10 mm，插入加样梳，静置，待凝胶凝固成无气泡的均匀薄层，拔出加样梳，即得。

（3）对照品溶液及供试品溶液的制备

取限制性内切酶酶切反应项下的溶液作为对照品溶液及供试品溶液。

（4）点样与电泳

取对照品溶液及供试品溶液各9μl，加上样缓冲液各1μl，混匀，加到琼脂糖凝胶板上，在另一单独泳道加入DNA分子量标准5μl，恒压80V，电泳45分钟，关闭电源。

（5）结果判断

取琼脂糖凝胶板，置于凝胶成像仪上或紫外透射仪上成像，观察。对照品溶液应分别在271bp及52bp处各有一条DNA条带，供试品溶液DNA条带位置应与对照品溶液一致。