鹿瓜多肽注射液、注射用鹿瓜多肽品种的肽图项目检验方法

发布时间:2018-01-30

肽图取本品原液或加水溶解并稀释制成每1ml中含多肽2mg的溶液,作为供试品溶液;取鹿瓜多肽对照提取物适量,加水溶解并稀释制成每1ml中含多肽2mg的溶液,作为对照品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm×250mm,5μm或效能相当的色谱柱);以0.1%(ml/ml)三氟醋酸溶液为流动相A,0.085%(ml/ml)三氟醋酸乙腈溶液-0.1%(ml/ml)三氟醋酸溶液(80:20)为流动相B;柱温40;流速为每分钟0.8ml,检测波长为280nm。按下表进行梯度洗脱。取色氨酸对照品适量,加水溶解并稀释制成每1ml中约含12μg的溶液,取20μl注入液相色谱仪,记录色谱图,连续进样5次,主峰保留时间和峰面积的相对标准偏差分别不得过1.0%和2.0%。理论板数按色氨酸峰计算应不低于100000。取对照品溶液与供试品溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,用中药色谱指纹图相似度评价系统(2.0版)计算供试品溶液色谱图与对照品溶液色谱图的相似度,不得低于0.90(注:首先对鹿瓜多肽对照品溶液色谱图中所有的色谱峰进行积分,按峰面积归一化法计算各峰的相对比例,以对照品溶液色谱图中峰面积百分比大于等于4%的峰作为共有峰,计算供试品溶液色谱图与对照品溶液色谱图间的相似度)。

时间(分钟)

流动相A (%)

流动相B (%)

0

100

0

12

100

0

36

66

34

40

100

0

45

100

0

氨基酸精密量取本品原液或加水溶解并稀释制成每1ml中含多肽2mg的溶液适量,加等体积盐酸,充氮封口,置110水解24小时,启封,置蒸发皿中,水浴蒸发至干,加0.1mol/L盐酸溶液使残留物溶解并定量稀释至适宜浓度,作为水解氨基酸测定用供试品溶液;另取本品适量,作为游离氨基酸测定用供试品溶液,用氨基酸分析仪或适宜的高效液相色谱仪进行测定。取氨基酸对照品(门冬氨酸、谷氨酸、羟脯氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸)适量,精密称定,加0.1mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成适宜浓度,作为对照品溶液,同法测定。按外标法以峰面积计算各氨基酸含量,每1ml中水解氨基酸与游离氨基酸之差不得少于1.6mg。