有关物质取本品细粉适量(约相当于盐酸黄酮哌酯100mg),置100ml量瓶中,加溶剂[流动相A-流动相B(65:35)]溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液;精密称取盐酸黄酮哌酯对照品、杂质A(3-甲基黄酮-8-羧酸)对照品、杂质B(3-甲基黄酮-8-羧酸甲酯)对照品、杂质C(3-甲基黄酮-8-羧酸乙酯)对照品各约10 mg,分别置100ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀,分别作为对照品储备液。精密量取盐酸黄酮哌酯对照品储备液1.0ml,杂质A、杂质B 及杂质C 储备液各3.0ml,置100ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,作为混合对照品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以缓冲液(取1g己烷磺酸钠,加水适量使溶解,加三乙胺1ml和磷酸1ml,加水稀释到650ml,摇匀)作为流动相A,乙腈作为流动相B;检测波长为293nm;流速为每分钟1.0ml。取混合对照品溶液20μl注入液相色谱仪,先以流动相A-流动相B(65:35)等度洗脱,待第一个色谱峰(黄酮哌酯峰)洗脱完毕,立即按下表进行线性梯度洗脱。黄酮哌酯、杂质A、杂质B、杂质C依次出峰,各峰间分离度应符合规定。精密量取供试品溶液与混合对照品溶液各20μl分别注入液相色谱仪,记录色谱图。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 65 | 35 |
t+2 | 65 | 35 |
t+17 | 20 | 80 |
t+18 | 65 | 35 |
t+25 | 65 | 35 |
注:t为混合对照品溶液中第一个峰(黄酮哌酯峰)的保留时间 |