色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,Capcell C18色谱柱(柱长为625px,柱内径为4.6mm,粒径为5μm);以乙腈为流动相A,0.05%磷酸溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长为270nm;柱温为30℃;流速为0.8ml/min;。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于6000。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~10 | 10→20 | 90→80 |
10~35 | 20→24 | 80→76 |
35~45 | 24→28 | 76→72 |
45~55 | 28→54 | 72→46 |
55~92 | 54 | 46 |
92~93 | 54→83 | 46→17 |
93~105 | 83 | 17 |
参照物溶液的制备取丹酚酸B对照品适量,精密称定,加甲醇配制成每1mL含丹酚酸B 50μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备取本品,去除包衣后,研细,精密称重,称取1g于具塞锥形瓶中,精密加入25ml甲醇溶液,称定重量,加热回流90分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。
测定法精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,记录115分钟色谱图,即得。
供试品特征图谱中应呈现10个特征峰,其中与丹酚酸B参照物峰相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,应在规定值的±5%之内。规定值为:0.19(峰1)、0.31(峰2)、0.64(峰3)、0.75(峰4)、0.78(峰5)、1.00(峰S)、1.90(峰7)、2.30(峰8)、2.35(峰9)、2.64(峰10)。
峰1为丹参素钠,峰2为原儿茶醛,峰3为柚皮苷,峰4为新橙皮苷,
峰5为迷迭香酸,峰6为丹酚酸B,峰7为二氢丹参酮Ⅰ,峰8为隐丹参酮
峰9为丹参酮Ⅰ,峰10为丹参酮ⅡA
对照特征图谱