【检查】照液相色谱-质谱联用法(中国药典2015年版通则0512和通则0431)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶(2.1mm×150mm,2.6μm)为填充剂;以乙腈-0.1%甲酸溶液(50:50)为流动相,流速为0.3ml/min;采用质谱检测器检测,按下表中的规定进行多反应监测:
| 扫描类型 | 筛查成分 | 成分归属 | 母离子 | 子离子 | CE | 监测模式 |
1 | MRM | 短葶山麦冬皂苷C | 短葶山麦冬 | 915.7 [M+HCOO]- | 869.8、737.5 | 20eV | Negative |
2 | MRM | 麦冬皂苷D | 麦冬 | 899.8 [M+HCOO]- | 853.7、721.8 | 18eV | Negative |
3 | MRM | 山麦冬皂苷B | 湖北麦冬 | 723.2 [M+H]+ | 269.0、395.3 | 26eV | Positive |
对照品溶液的制备取麦冬皂苷D,山麦冬皂苷B和短葶山麦冬皂苷C对照品适量,加甲醇制成每1ml各含1μg的混合溶液,即得。
供试品溶液的制备取清热解毒片5片,除去包衣,研细,加甲醇25ml,超声处理30分钟,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加水25ml使溶解,用水饱和正丁醇振摇提取2次,每次15ml,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇5ml使溶解,滤过,取续滤液,即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl,注入液相色谱-质谱联用仪,测定,即得。
结果判断以m/z723.2→m/z269.0和m/z723.2→m/z395.3提取的供试品离子流色谱中,应不得出现与山麦冬皂苷B对照品色谱保留时间一致的色谱峰;以 m/z915.7→m/z869.8和m/z915.7→m/z737.5提取的供试品离子流色谱中,应不得出现与短葶山麦冬皂苷C对照品色谱保留时间一致的色谱峰。