【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇为流动相A;以0.4%磷酸溶液为流动相B,按下表的规定进行梯度洗脱;检测波长280nm。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~15 | 30 | 70 |
15~24 | 30→38 | 70→62 |
24~32 | 38→55 | 62→45 |
32~55 | 55 | 45 |
55~70 | 55→70 | 45→30 |
参照物溶液的制备取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷和吴茱萸次碱适量,精密称定,加甲醇制成每ml分别含盐酸小檗碱45µg、盐酸巴马汀21µg、柚皮苷26µg、橙皮苷63µg、新橙皮苷21µg、黄芩苷41µg和吴茱萸次碱11µg的混合溶液,即得。
供试品溶液的制备取装量差异项下的本品,研细,取约1.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇-盐酸(100:1)混合溶液50ml,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用50%甲醇-盐酸(100:1)混合溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法分别精密吸取参照物溶液和参照物溶液各10µL,注入液相色谱仪,测定,即得。
以盐酸小檗碱为S峰,建立对照指纹图谱,色谱图如下。按中药色谱指纹图谱相似度评价系统,供试品指纹图谱与对照指纹图谱经相似度计算,以特征化合物色谱峰为主进行mark峰匹配模式计算,其相似度不得低于0.90。
图加味左金丸对照指纹图谱
3(S).盐酸小檗碱4. 芸香柚皮苷5. 盐酸巴马汀6. 柚皮苷7.橙皮苷8.新橙皮苷9. 黄芩苷10.汉黄芩苷11.黄芩素13. 吴茱萸次碱