苯扎溴铵、羟苯乙酯与硫柳汞根据所使用的抑菌剂选择测定。照高效液相色谱法（中国药典2015年版四部通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以1%三乙胺溶液（用磷酸调节pH值至3.0）为流动相A,以甲醇为流动相B, 按下表进行梯度洗脱；苯扎溴按检测波长为218nm，羟苯乙酯和硫柳汞检测波长为262nm。羟苯乙酯峰、苯扎溴铵峰与硫柳汞峰之间的分离度均应符合规定。

测定法：精密称取硫柳汞对照品约20mg，加水溶解并稀释至50ml，作为硫柳汞储备液；精密称取苯扎溴按对照品约20mg，加水溶解并稀释至100ml，作为苯扎溴按贮备液；精密称取羟苯乙酯对照品20mg，置100ml量瓶中，加乙醇4ml溶解并用水稀释至刻度，作为羟苯乙酯储备液。分别精密量取硫柳汞储备液、苯扎溴按储备液、羟苯乙酯储备液各5ml，置同一50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为混合对照溶液。取本品作为供试品溶液。精密量取供试品溶液与混合对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积分别计算，供试品中含羟苯乙酯、苯扎溴铵或硫柳汞类抑菌剂的量，均应为标示量的80.0%～120.0%。