【含量测定】
葛根照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,0.4 %磷酸为流动相B,按下表中规定进行梯度洗脱;流速为1.0 ml/min;检测波长为250 nm;理论塔板数按葛根素峰计算应不低于20000。
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~25 | 5→15 | 95→85 |
25~38 | 15→25 | 85→75 |
38~40 | 25→30 | 75→70 |
40~50 | 30→15 | 70→85 |
50~70 | 15→70 | 85→30 |
70~80 | 70→5 | 30→95 |
80~90 | 5 | 95 |
对照品溶液的制备取葛根素对照品适量,精密称定,加30%乙醇制成每1ml含45μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备取本品10片,除去包衣,精密称定,研细,取约0.1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入30%乙醇溶液25ml密塞,称定重量,超声处理10分钟,放冷,再称定重量,用30%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,以葛根素对照品的峰面积为对照,分别按下表相对应的校正因子计算葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的含量,用待测成分色谱峰与葛根素色谱峰的相对保留时间确定3’-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的峰位,其相对保留时间应在规定值的±5%范围之内(若相对保留时间偏离超过5%,则应以相应的被替代对照品确证为准),即得。相对保留时间及校正因子(F)见下表:
待测成分(峰) | 相对保留时间 | 校正因子(F) |
葛根素 | 1 | 1 |
3’-甲氧基葛根素 | 1.08 | 1.27 |
大豆苷 | 1.25 | 1.18 |
大豆苷元 | 2.03 | 0.78 |
本品每片含葛根以葛根素(C21H20O9)、3’-甲氧基葛根素(C22H22O10)、大豆苷(C21H20O9)、大豆苷元(C15H10O4)的总量计,糖衣片不得少于1.70 mg,薄膜衣片不得少于3.40 mg。