色谱条件及系统适用性色谱柱:Thermo Syncronis aQ , 4.6×250mm,5μm;流速:1ml/min;柱温:30℃;检测波长:200nm;进样量:10μl,流动相A为乙腈, 流动相B为水(磷酸调pH为2.2)按下表进行梯度洗脱,记录色谱图,各峰之间的分离度应符合要求。
梯度洗脱时间表
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 0 | 100 |
5 | 0 | 100 |
10 | 45 | 55 |
22 | 45 | 55 |
25 | 0 | 100 |
30 | 0 | 100 |
测定法
供试品溶液的制备:精密量取供试品1ml(1ml:50mg),置10ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,既得。
对照品溶液的制备:
L-半胱氨酸对照品溶液:精密称取L-半胱氨酸100mg,置50ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀;
亚硫酸氢钠对照品溶液:精密称取亚硫酸氢钠50mg,置50ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀;
焦亚硫酸钠对照品溶液:精密称取焦亚硫酸钠30mg,置50ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀;
依地酸二钠对照品溶液:精密称取依地酸二钠40mg,置50ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀。
分别取供试品溶液与对照品溶液10μl注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算,既得。