蛇胆川贝液检验方法(2):蛇胆川贝液中蛇胆汁的掺伪检查的检验方法

发布时间:2017-06-21

蛇胆川贝液

Shedanchuanbei Ye

本补充检验方法适用于蛇胆川贝液中非法添加猪胆汁、牛胆汁及羊胆汁的筛查和确证。

【检查】 猪胆汁、牛胆汁及羊胆汁照高效液相色谱法-质谱法(中国药典2015年版四部通则0512和通则0431)测定。

色谱、质谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂(色谱柱内径2.1mm);以乙腈:甲醇(1:3)(每1000ml中加乙酸铵0.38g、冰醋酸0.9ml)为流动相A,以5mmol/L乙酸铵水溶液(用冰醋酸调至pH4.0)为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;流速为0.2ml/min,柱温30。以质谱作为检测器,电喷雾离子源:ESI-,多反应监测(MRM),选择m/z448.1→73.9,m/z448.1→386.2及m/z448.1→368.2作为检测离子对。甘氨猪去氧胆酸色谱峰(m/z448.1→368.2)的检出限不低于0.3ng。

时间(min)

流动相A(%)

流动相B(%)

0

30

70

8

65

35

30

70

30

31

95

5

33

95

5

34

30

70

对照品溶液的制备取甘氨去氧胆酸、甘氨猪去氧胆酸对照品适量,分别加甲醇制成浓度为0.50μg/ml的对照品溶液,摇匀,即得。

供试品溶液的制备精密量取本品20ml,用乙醚振摇提取2次(20ml,15ml),水液备用,合并乙醚液,用水洗涤2次,每次5ml,分取水液,与备用水液合并,置水浴上蒸至无乙醚味,通过D101型大孔树脂柱(内径37.5px,柱高250px),用水200ml洗脱,弃去水液,再用乙醇60ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇溶解并定容至2ml,滤过,取续滤液,即得。

测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱-质谱联用仪,测定,即得。

结果判断以m/z448.1→73.9、m/z448.1→386.2和m/z448.1→368.2提取的供试品离子流图色谱中,应不得同时出现与甘氨猪去氧胆酸对照品色谱保留时间一致的色谱峰(判断猪胆汁掺伪)。以m/z448.1→73.9和m/z448.1→386.2提取的供试品离子流色谱中,若同时出现与甘氨去氧胆酸对照品色谱保留时间相同的色谱峰,则要求供试品中m/z448.1→73.9的峰面积不得超过甘氨去氧胆酸对照品中m/z448.1→73.9的峰面积。