蒲黄

POLLEN TYPHAE

【检查】柠檬黄、酸性黄36和金胺O照高效液相色谱法（《中国药典》四部通则0512）测定

色谱条件与系统适应性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以0.02mol/L的乙酸铵溶液为流动相B，按照下表梯度进行洗脱：

采用二极管阵列检测器，检测波长为428nm（柠檬黄）；422nm（酸性黄36）；436nm（金胺O）。理论塔板数按酸性黄36峰计算，应不低于10000。

对照品溶液的制备 取柠檬黄，酸性黄36和金胺O对照品（试剂）适量，加70%乙醇制成每1ml含25μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取2g，精密称定，精密加入70%乙醇20ml，称定重量，超声处理(功率90 W，频率40 kHz) 20分钟，放冷，补重，离心（转速4000r•min-1， 5 分钟），取上清液滤过，即得。

测定法 分别精密吸取对照品（试剂）溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

结果判断 供试品色谱中，应不得出现与对照品（试剂）色谱保留时间相同的色谱峰。若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在200~700nm波长范围内的吸收光谱，应不相同。

备注：1. 必要时，可采用高效液相色谱-液质联用方法作进一步验证。建议采用乙腈-0.02mol/L醋酸铵流动相系统。质谱检测参数：装配有电喷雾离子源；扫描方式： ESI－扫描。同时进行一级质谱全扫描、二级质谱全扫描，扫描范围：100~600m/z。

2. 因柠檬黄HPLC保留较弱，建议采用250mm规格色谱柱，DAD检测以428nm附近是否出现最大吸收峰为主要判断依据。