1、龟甲取本品5片，包衣片除去包衣，研细，混匀，取约相当于龟甲0.1g，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40ml，超声处理60分钟，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，即得。用0.22 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液100μl，加入胰蛋白酶溶液（取序列分析用胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶液适量使溶解，制成每1μl中含2μg的溶液，应临时配制）15μl，摇匀，37℃恒温酶解20小时，作为供试品溶液。另取龟甲胶对照药材0.1g，自“置50ml量瓶中”起，同法制成对照药材溶液。照高效液相色谱-质谱法（中国药典2015年版四部通则0512和通则0431）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径为2.1mm)；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.3ml。采用三重四极杆质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI⁺），进行多反应监测（MRM），选择质荷比m/z631.3（双电荷）→546.4和m/z631.3（双电荷）→921.4作为检测离子对。取龟甲胶对照药材溶液，进样5μl，按上述检测离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于3︰1。

吸取供试品溶液5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定。

2、阿胶取龟甲检查项下供试品溶液作为供试品溶液。另取阿胶对照药材0.1g，自“置50ml量瓶中”起，同法制成对照药材溶液。照高效液相色谱-质谱法（中国药典2015年版四部通则0512和通则0431）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径为2.1mm)；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速为每分钟0.3ml。采用三重四极杆质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI⁺），进行多反应监测（MRM），选择质荷比（m/z）539.8（双电荷）→612.4和m/z539.8（双电荷）→923.8作为检测离子对。取阿胶对照药材溶液，进样5μl，按上述检测离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于3︰1。

吸取供试品溶液5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定。

3、牛皮源成分照高效液相色谱-质谱法(中国药典2015年版通则0512和通则0431)测定。

色谱、质谱条件以十八烷基键合硅胶为填充剂（色谱内径为2.1mm）；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速0.3ml/min，以三重四级杆串联质谱作为检测器，电喷雾离子源（ESI），采集模式为正离子模式，多反应监测（MRM），选择m/z 641.3（双电荷）→726.2和m/z 641.3（双电荷）→783.3为检测离子对。取牛皮源成分参比溶液，进样5μl，m/z 641.3（双电荷）→726.2和m/z 641.3（双电荷）→783.3的MRM色谱峰的信噪比均应大于3∶1。

参比溶液的制备取黄明胶对照药材0.1g，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液溶液40ml，超声处理60分钟，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置100ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶稀释至刻度，摇匀，用0.22 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液100 μl，置微量进样瓶中，加入胰蛋白酶溶液（取序列分析纯胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶溶液适量使溶解，制成每1 μl中含2μg的溶液，本品应临时配制）15μl，摇匀，37℃恒温酶解20小时，制得牛皮源成分参比溶液。

供试品的制备方法取本品(包衣片除去包衣)适量，研细，混匀，取适量（约相当于含阿胶0.1g），置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶溶液40ml，超声处理60分钟，加1%碳酸氢铵溶溶液稀释至刻度，摇匀，自“用0.22 μm的微孔滤膜滤过”起，照牛皮源成分参比溶液的制备方法同法操作，制得供试品溶液。

测定法分别精密吸取牛皮源成分参比溶液与供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定。