注射用辅酶A检验方法(1):注射用辅酶A中有关物质的检验方法

发布时间:2017-06-20

有关物质取本品,加水溶解并稀释制成每1ml中含0.48mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取供试品溶液2.5ml ,置10ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液。照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以磷酸盐缓冲液(pH6.5)—甲醇(90:10)为流动相A;以磷酸盐缓冲液(pH6.5)—甲醇(50:50)为流动相B,按下表进行梯度洗脱,调节流动相A比例使辅酶A峰的保留时间在10~20分钟。检测波长为259nm,柱温为25。取辅酶A对照品约4mg,加入1mol/L盐酸溶液2ml使溶解,于35℃放置3小时,放冷,加入1mol/L氢氧化钠溶液2ml,加入水6ml,混匀,制得辅酶A与杂质Ⅳ的混合溶液,取10μl注入液相色谱仪,记录色谱图,辅酶A峰与其后的杂质Ⅳ峰(相对保留时间约为1.14)间的分离度应符合要求。精密量取对照溶液与供试品溶液各10μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。

时间(分钟)

流动相A(%)

流动相B(%)

0

15

35

45

48

58

100

100

80

60

100

100

0

0

20

40

0

0