照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验色谱柱：Waters Xselect® HSS T3 C18 (250×4.6mm，5µm；NO:01153524613403)；以乙腈为流动相A，0.05%磷酸为流动相B，按下表规定的梯度进行洗脱；检测波长为220nm。理论板数按天麻素峰计算应不低于5000。进样体积10μl。
时间（分钟） | 流动相A（%） | 流动相B（%） |
0～15 | 2 | 98 |
15～30 | 2→10 | 98→90 |
30～40 | 10→20 | 90→80 |
40～50 | 20→25 | 80→75 |
50～55 | 25→80 | 75→20 |
对照品溶液的制备 取天麻素对照品适量，精密称定，加乙腈-水（3：97）制成每1ml含天麻素5μg的溶液；再取巴利森苷对照品适量，精密称定，加乙腈-水（3：97）制成每1ml含巴利森苷10μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品装量差异或重量差异项下的水蜜丸适量，研碎，混匀，取约2g，精密称定；或取量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约4g，精密加入硅藻土4g，研匀，取4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加流动相溶解并转移至25ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
天麻药材溶液的制备 取天麻药材粉末0.2g，精密称定，同供试品溶液的制备方法制备天麻药材供试品溶液。
测定法 分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
图1各批天麻药材HPLC色谱峰重叠图
图2 天麻药材、天麻阴性对照和天麻丸样品色谱峰重叠图
图3天麻丸（水蜜丸）HPLC色谱重叠图
1.天麻素；3.巴利森苷
