照高效液相色谱法测定
色谱条件十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 (phenomenex Kinetex C18 100×4.6mm，2.6μm)的色谱柱；流动相：水（A）-乙腈（B）梯度洗脱，洗脱程序见下表；检测波长：320nm；柱温：30℃；流速：1.2 mL·min-1。
时间（分钟） | 流动相A（水%） | 流动相B（乙腈%） |
0～50 | 98→50 | 2→50 |
50～60 | 50→20 | 50→80 |
60～65 | 20 | 80 |
对照品溶液的制备 取紫花前胡苷、羌活醇、二氢欧山芹醇当归酸酯、蛇床子素、藁本内酯、异欧前胡素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含10μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品水蜜丸适量，研碎，混匀，取1g，精密称定；或取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取5g，精密称定，精密加入硅藻土5g，研匀，取4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，浸泡过夜，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
羌活、独活、当归的对照药材溶液 取羌活、当归对照药材各0.1g、独活对照药材0.05g，分别精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，同法制备各对照药材溶液。
测定法分别精密吸取各对照品溶液与上述供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。
天麻丸特征图谱中13个特征峰的归属表
峰号 | 药材归属 | 化学成分归属 |
1 | 羌活 | - |
2 | 羌活 | 紫花前胡苷 |
3 | 独活 | - |
4 | 独活 | - |
5 | 独活 | - |
6 | 独活 | - |
7 | 独活 | - |
8 | 独活 | - |
9 | 独活 | - |
10 | 当归 | 藁本内酯 |
11 | 羌活 | 羌活醇 |
12 | 独活 | 蛇床子素 |
13 | 羌活 | 异欧前胡素 |
注：其中归属于羌活的4个峰，独活8个峰，当归1个峰。1、2号峰为羌活专属好的特征双峰；5、6、7、8、9号峰为独活专属性强的特征峰群；二氢欧山芹醇当归酸酯色谱峰因为独活阴性对照有干扰，因此未选择作为特征峰。
图1 天麻丸HPLC特征图谱
